基于LC-MS/MS方法测定临床严重肾损伤患者血浆中的多种抗生素

        Joanna Q Hudson等人近期报道建立一种高效的LC-MS/MS方法同时测量血浆中的多种抗生素（万古霉素，美罗培南，头孢吡肟，达托霉素和哌拉西林/他唑巴坦），研究了甲酸浓度对信号强度和基质效应的影响，将方法应用到临床严重肾损伤患者的血浆样本中抗生素的检测中。

        实验仪器采用Agilent 1100色谱系统联合AB SCIEX 3000三重四极杆质谱对目标化合物进行分析，色谱柱采用Agilent ZORBAX Eclipse C18柱，内径50mm×2.1mm。流动相采用水和乙腈（均含有25mM甲酸），进行梯度洗脱，流速0.4ml/min，分析时间6min。血浆样品的前处理首先用等体积的水稀释，然后加乙腈进行沉淀蛋白，在沉淀蛋白之前加水稀释可以提高提取回收率。

        方法的选择性考察了空白血浆样本，空白血浆加标样本和病人血浆样本，结果如图1所示，显示方法具有良好的选择性。

图1 空白血浆（左），空白血浆加标（1.8µg/ml，中），实际病人血浆（右） 6种抗生素及氘代内标

        接下来，作者等人对流动相中的甲酸浓度进行了考察。首先进行了峰形的考察，选择两个浓度的达托霉素（DAP）（0.62µg/ml和50µg/ml）进行了加甲酸前后峰形的考察，加入甲酸之后峰形可以得到明显的改善，结果如图2所示；其次，通过向流动相中添加不同浓度的甲酸，考查甲酸浓度对抗生素信号强度和基质效应的影响，结果如图3所示。由图可知，通过向流动相中加入不同浓度的甲酸可使基质效应得到明显的改善，而甲酸浓度在25mM时，所有目标化合物（除哌拉西林/他唑巴坦外）的基质效应都能控制在目标范围内。

图2  流动相中甲酸对峰形的影响

图3  流动相中甲酸浓度（0-25mM）对抗生素信号强度（峰面积）和基质效应的影响；黑点代表标准溶液的信号强度（Set1），红点代表空白基质加标的信号强度（Set2）；基质效应=Set2平均峰面积/Set1平均峰面积×100%

       方法验证包括基质效应、精密度、准确度和稳定性等，验证结果显示方法准确可靠。

       作者将已建立的方法成功应用于临床严重肾损伤患者的临床药代动力学研究，药时曲线结果如图4所示。

图4 临床严重肾损伤患者的抗生素血浆浓度-时间曲线

        该研究建立了同时测定万古霉素，美罗培南，头孢吡肟，达托霉素和哌拉西林/他唑巴坦等抗生素的液质联用方法，前处理方法简单，分析时间短。该研究还评估了流动相中甲酸浓度如何影响信号强度和基质效应。最终该方法成功应用于临床严重肾损伤患者的药代动力学研究。

参考文献:Chen F, Hu Z Y,Laizure S C, et al. Simultaneous assay of multiple antibiotics in human plasmaby LC-MS/MS: importance of optimizing formic acid concentration.[J].Bioanalysis, 2017, 9(5):469.

文献整理人：张丹；编辑：生宁  张金兰；第58期